Figura 4.- Resultados de la técnica de
microsatélites. Foto de un gel de acrilamida mostrando los alelos de 17 variedades de
vid. Se han separado en un gel dos loci simultáneamente, VVS3 y VVS4.
duos en poblaciones animales o vegetales. La forma más sencilla
de analizar la variación de las regiones microsatélites es recurrir a la PCR.
Sintetizando cebadores complementarios a las regiones flanqueantes del microsatélite, las
diferencias en el número de repeticiones del motivo básico del microsatélite se
amplificarán y visualizarán como fragmentos de ADN de diferente longitud (Figura 3).
Cada una de las regiones microsatélites constituye un locus genético y los
diferentes tamaños de bandas que se pueden amplificar constituyen los diversos alelos de
ese locus.
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Esta
comparación de datos se ve facilitada por el hecho de que los resultados de
microsatélites se expresan numéricamente, mediante el tamaño en pares de nucleótidos
de los dos alelos de cada locus. La complejidad técnica de los microsatélites es
de nivel medio. Dado que algunos alelos difieren únicamente en un nucleótido, hay que
recurrir a una separación electroforética de los mismos en gel de acrilamida y tinción
mediante nitrato de plata.
El mayor inconveniente de los microsatélites es que no están
disponibles para todas las especies cultivadas. Para que la técnica sea aplicable, es
esencial determinar las secuencias flanqueantes de las regiones microsatélites para cada
especie a fín de diseñar los cebadores adecuados. Esto requiere un proceso laborioso de
clonaje y secuenciación. En la actualidad, el método es plenamente operativo para el
caso de vid y cereales más cultivados, y es previsible que en un futuro próximo se
podrá aplicar a las especies cultivadas más importantes.
RAPD-PCR (Random Amplified
Polymorphic DNA-PCR): Esta
técnica consiste en una PCR con una variante. Los cebadores que se utilizan son más
cortos de lo normal (10 nucleótidos) y son de secuencia arbitraria. Además, la fase de
hibridación de los cebadores se verifica a una temperatura de 34 a 36 1C, en lugar de los
55-60 1C habituales.
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